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　　1、本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。

　　保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。

　　3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。

　　4、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以代測(cè)樣本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。

　　ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線平直，一般有以下原因：標(biāo)準(zhǔn)曲線制備是否不當(dāng)，洗孔不凈，吸孔不充分，讀數(shù)不準(zhǔn)確或是吸量誤差。查找原因，即可找到相應(yīng)解決方案。

　　檢測(cè)目的是為實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確可靠定量分析實(shí)驗(yàn)依據(jù)。為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制。

　　胱抑素CElisa試劑盒操作步驟

　　1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

　　3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

　　4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

　　6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

　　8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。

　　9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。