ELISA試劑盒包被的時間與溫度
說到ELISA試劑盒包被,可能大多朋友們關注的是包被的時間與溫度。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。
蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射,以增加其吸附性能。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其后通過抗原抗體反應使抗原固相化。也可用親和素系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。