綜合微生物的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)前期準(zhǔn)備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設(shè)備和材料;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料;
(3)導(dǎo)入曝氣,進(jìn)行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng);
(5)分離并檢測(cè);
(6)取液儲(chǔ)存;通過(guò)該綜合微生物培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單可操作性強(qiáng),培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi),菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規(guī)格參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
土曲霉品牌 | Aspergillu | EY-J963309 |
資源名稱: 土曲霉
種屬: Aspergillus terreus Thom
提供形式: 凍干粉
安全等級(jí): 1
模式菌株: no
培養(yǎng)基: 綜合PDA:20%馬鈴薯液1.0L,葡萄糖20.0g,二氫鉀3.0g,七水鎂1.5g,1 8mg,瓊脂20.0g,pH自然。20%馬鈴薯液配置:取200g去皮馬鈴薯,煮沸30min,過(guò)濾取濾液,補(bǔ)足至1.0L。
生長(zhǎng)條件: 25-28℃,好氧
低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3~4個(gè)月;②液氮超低溫保存法,將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內(nèi),然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。
Loktanella│maricola 中文名稱:居海洛克氏菌Loktanella│maricola分離基物:樣/海提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:;培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:>98.0%(GC)
Aquimarinamuelleri 中文名稱:AquimarinamuelleriAquimarinamuelleri分離基物:培養(yǎng)基:海樣本,日本安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102生長(zhǎng)條件:28℃ 純度:97%
Shimiaisoporae 中文名稱:ShimiaisoporaeShimiaisoporae安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102生長(zhǎng)條件:25℃ 純度:97%
Loktanella│hongkongensis 中文名稱:香港洛克氏菌Loktanella│hongkongensis分離基物:沉積物/深海淺黃色鈣質(zhì)軟泥提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:端微生物/抗γ輻射培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1001生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Roseivivaxisoporae 中文名稱:RoseivivaxisoporaeRoseivivaxisoporae安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102生長(zhǎng)條件:25℃ 純度:97%
Roseivivaxhalodurans 中文名稱:RoseivivaxhaloduransRoseivivaxhalodurans分離基物:疊層石上的輪藻安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:168生長(zhǎng)條件:28℃ 純度:97%
Gramellaechinicola 中文名稱:GramellaechinicolaGramellaechinicola分離基物:中間球海膽安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102生長(zhǎng)條件:28℃ 純度:99%
Oceanicola│marinus 中文名稱:海洋海棲菌Oceanicola│marinus分離基物:樣/上層海提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99%
土曲霉品牌Nutrient Agar人表皮黑色素細(xì)胞-中色素微小RNA4-溴異喹啉H1N1(Influenza A virus ,hemagglutinin) 流感病A抗原
麥芽浸出液瓊脂人表皮黑色素細(xì)胞-深色素微小RNA4-溴異喹啉Haase(hyaluronidase) 透明質(zhì)酶/玻璃酶抗原
Malt Extract Agar人成纖維細(xì)胞-胎兒微小RNA4-溴異喹啉HA tag HA tag標(biāo)簽多肽
Fluid Lactose Medium人成纖維細(xì)胞-新生兒微小RNA4,4′-雙(2-苯并噁唑基)二苯乙烯HA tag(map) HA tag標(biāo)簽(分支多肽)
Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)人成纖維細(xì)胞-微小RNA4,4′-雙(2-苯并噁唑基)二苯乙烯HAI-1(Hepatocyte Growth Factor Activator Inhibitor 1) 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子激活物抑制因子抗原
Baird-Parker Agar Base人毛細(xì)胞微小RNA六銠三銨HBA1(hemoglobin alpha 1) 人類血紅蛋白α1抗原
卵黃亞碲鹽增菌液人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞微小RNA3,5-二-4-基吡VWCE/URG11(von Willebrand factor C and EGF domain-containing) 乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原
EY lurite Enrichment人外根殼細(xì)胞微小RNA3,5-二-4-基吡URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation) 乙型肝炎病X蛋白(HBxAg)抗原