1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
商品描述：
產(chǎn)品名稱 | kyse30 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | 規(guī)格 | 1*125ml/500ml |
用途 | 僅供科研研究實驗 | 貨號 | EY-XP5745 |
kyse30 細(xì)胞專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持kyse30 細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含kyse30 細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于kyse30 細(xì)胞的培養(yǎng)。
產(chǎn)品主要成分
RPMI-1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 240 ml
F-12 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 240 ml
特級胎牛血清 10 ml
P/S青霉su-鏈霉su 5 ml
GlutaMAX-1谷氨酰an 5 ml
運輸和保存
運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸
保存方法：2℃～8℃，避光，保存1個月；-20℃，避光，保存3個月。
質(zhì)量控制
檢測項目 | 質(zhì)量控制 |
澄清度 | 澄清 |
PH | 7.3±0.2 |
內(nèi)毒素含量 (EU/mL) | ≤10 |
無菌檢測 | 細(xì)菌 | 陰性 |
真菌 | 陰性 |
支原體 | 陰性 |
細(xì)胞生長試驗 | 細(xì)胞形態(tài) | 正常 |
細(xì)胞生長實驗 | 合格 |
注意事項：
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產(chǎn)品：
SW780人膀胱移行細(xì)胞癌 | C643 細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞紅色熒光NIH/3T3/RFP | OKT11小鼠雜交瘤（抗CD2）細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人卵巢癌細(xì)胞UWB1.289+BRCA1 (STR鑒定正確) | P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人膀胱癌細(xì)胞BIU-87(STR鑒定正確) | P388D1小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3-Swiss albino（種屬鑒定） | P815小鼠肥大瘤細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠乳腺癌細(xì)胞帶熒光素酶 4T1+LUC（種屬鑒定） | panc02小鼠胰腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人胃腺癌細(xì)胞AGS(STR鑒定正確) | panc02+LUC小鼠胰腺癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞AR42J（種屬鑒定） | PT-67小鼠源基于MLV-A1逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝系細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染OVA B16+OVA（種屬鑒定） | RAG小鼠腎腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
鼻咽癌細(xì)胞株 5-8F（STR鑒定） | RAW 264.7小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人慢性髓系白血病細(xì)胞K562(STR鑒定正確) | RAW 264.7+GFP小鼠單核巨噬白血病+GFP細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人肺癌腺癌細(xì)胞LC-2/AD (STR鑒定正確) | Renca小鼠腎癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
小鼠肝癌H22（種屬鑒定） | RGC-5小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人類原巨核細(xì)胞型白血病細(xì)胞UT-7(STR鑒定正確) | RM-1小鼠前列腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
人甲狀腺癌細(xì)胞 ACT-1(STR鑒定正確) | RM-1+LUC小鼠前列腺癌熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
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